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血小板計數(shù)法（直接試管法）

１原理用一種能破壞血液中的紅細(xì)胞，但能保護(hù)血小板形態(tài)完整的稀釋液稀釋血液，滴入血細(xì)胞計數(shù)池，在高倍鏡下直接計數(shù)血小板數(shù)。２器材和試劑器材同白細(xì)胞計數(shù)法。稀釋液用許汝和氏尿素稀釋液。許汝和氏尿素稀釋液配制法：尿素１０ｇ，福爾馬林０．１ｍｌ，枸櫞酸鈉０．５ｇ，加水至１００ｍｌ，溶解后過慮，在冰箱內(nèi)保存。３操作步驟ａ．用２ｍｌ吸管準(zhǔn)確吸取血小板稀釋液０．３８ｍｌ置小試管中。ｂ．從耳垂采血，用０．０２ｍｌ吸管準(zhǔn)確吸取*滴血，吹入稀釋液中，并吹吸兩次洗凈吸管壁內(nèi)的血。ｃ．充分振搖，滴入...

白細(xì)胞計數(shù)法（試管法）

１原理用稀乙酸將血液稀釋２０倍，使紅細(xì)胞全部溶解，滴入白細(xì)胞計數(shù)池中，在顯微鏡下計數(shù)，求得每立方毫米血液中的白細(xì)胞數(shù)。２器材和試劑２．１器材生物顯微鏡、Ｎｅｕｂａｕｅｒ氏血細(xì)胞計數(shù)池、０．０２ｍｌ吸管、小試管、刺血針、２ｍｌ吸管。２．２試劑白細(xì)胞稀釋液：采用３％乙酸溶液。３稀釋液的配制采用３％乙酸溶液。即取冰乙酸３ｍｌ，加蒸餾水至１００ｍｌ混合。亦可于上述稀釋液中加美藍(lán)或龍膽紫液１～２滴，便于觀察。稀釋液應(yīng)經(jīng)常過濾，以除去塵埃、異物或微生物的影響。４方法４．１取血于小試管中加...

影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是...

實驗采血要點

材料與試劑1．抗凝劑（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，進(jìn)而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4％的溶液備用。（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：枸櫞酸鈉（Na3C6H5O7·5H2O）0.80g枸櫞酸0.0325g葡萄糖2.05g氯化鈉0.42gH2O加至100.00ml...

血細(xì)胞分離原理

在體外進(jìn)行細(xì)胞免疫檢測時，首先必須進(jìn)行淋巴細(xì)胞的分離。分離淋巴細(xì)胞的方法很多，但不管采用哪種方法，均要求分離的淋巴細(xì)胞純度高、產(chǎn)量多，而且不喪失活性，同時也要求分離技術(shù)簡單、操作方便。外周血液中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的比例在幾百甚至上千比一，兩類細(xì)胞的大小和密度不同，其沉降速度也就不同。紅細(xì)胞的自然沉降率較快，加入高分子量的聚合物，如明膠、右旋糖酐等還可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度離心法或二者結(jié)合，可以將淋巴細(xì)胞從血液中分離出來。這種分離出的淋巴細(xì)胞一般包括單核細(xì)胞。除去單...

ELI-SPOT 及其應(yīng)用

一、原理ELI-SPOT，即斑點ELISA，是利用酶標(biāo)板作反應(yīng)容器進(jìn)行的酶聯(lián)免疫反應(yīng)。其基本原理與ELISA相同。首先用捕獲抗體包被反應(yīng)板，封閉后，依次加入待檢標(biāo)本、生物素化檢測抗體、鏈霉菌抗生物素蛋白-堿性磷酸酶及底物，陽性結(jié)果出現(xiàn)斑點顯色，利用倒置顯微鏡進(jìn)行斑點計數(shù)。其優(yōu)勢在于可在與體內(nèi)（活體條件）極接近的條件下，在體外對細(xì)胞分泌成分（如細(xì)胞因子、Fas等）進(jìn)行追蹤研究。幾點說明：l反應(yīng)板：ELI-SPOT所用的反應(yīng)板可以是PVDF膜包被好的，也可以是普通酶標(biāo)板。如用普通...

細(xì)胞內(nèi)鈣離子PH值和其它離子的動態(tài)分析

細(xì)胞內(nèi)鈣離子PH值和其它離子的動態(tài)分析通過Indo-1、Fluo-2、Fluo-3、Calciumgreen、SNARF等多種熒光探針，可對細(xì)胞內(nèi)鈣離子、鈉離子及PH值等作熒光標(biāo)記并對它們進(jìn)行比率值和濃度梯度變化測定。由于細(xì)胞內(nèi)鈣離子為傳遞信息的第二信使，對細(xì)胞生長分化起著重要作用，通過單標(biāo)記或雙標(biāo)記對細(xì)胞內(nèi)鈣離子和其它離子的熒光強(qiáng)度和分布測定，測定樣品達(dá)到毫秒級的快速變化。借助光學(xué)切片功能可以測量樣品深層的熒光分布以及細(xì)胞光學(xué)切片的生物化學(xué)特性的變化。通過不同時間段的檢測可...

重組人的載脂蛋白E2 ApoE2

Synonyms:ApolipoproteinE2Description:ApoEbelongstoagroupofproteinsthatbindreversiblywithlipoproteinａndplayanimportantroleinlipidmetabolism.Inadditiontofacilitatingsolublizationoflipids,theseproteinshelptomaintainthestructuralintegrityoflipo...